Tipificação molecular de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina isolados de infecção pulmonar crônica em pacientes com fibrose cística
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A prevalência de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) isolados em cultura de secreção respiratória de pacientes com Fibrose Cística (FC) aumentou na última década. A infecção persistente por MRSA nestes pacientes tem sido associada ao rápido declínio da função pulmonar, aumento da hospitalização e mortalidade. Estudos de tipificação molecular de MRSA colonizando/infectando cronicamente pacientes com FC ainda é escasso. O objetivo deste estudo foi realizar a tipificação molecular em amostras de MRSA oriundas de 12 pacientes pediátricos com FC apresentando colonização/infecção crônica. A partir dos resultados do estudo anterior do nosso grupo (perfil de resistência aos antimicrobianos, tipos de SCCmec, presença/ausência dos genes lukS/F e pulsotipos PFGE), foram selecionadas 80 amostras. O sequenciamento da região X do gene da proteína A (spa) foi realizado para tipificação molecular das amostras selecionadas. A técnica de microdiluição em caldo foi utilizada para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de vancomicina em todas as amostras selecionadas. Os maiores percentuais de resistência foram observados para os antimicrobianos eritromicina (62/80, 77,5%), ciprofloxacina (41/80, 51,25%) e clindamicina (27/80, 33,75%); não houve resistência à linezolida. Os seguintes tipos de SCCmec foram identificados: II (14/80, 17,5%), III (7/80, 8,75%) e IV (59/80, 73,75%). Os genes lukS/F estavam presentes em apenas 8,75% (7/80) das amostras, todas albergando o SCCmec IV. Foram identificados 38 pulsotipos pela técnica PFGE nas 80 amostras, apresentando alta diversidade genética. Nove tipos de spa foram identificados, sendo os tipos t002 (52,5%), t539 (15%) e t779 (8,8%) os mais frequentes. Identificamos um novo tipo de spa (t18066) em três amostras. O spa t002 foi o mais distribuído, presente em 10 dos 12 pacientes. Todas as amostras tipificadas como t539, t779 e t8784 foram multidroga resistentes. Foi possível prever o ST (Sequence Type) de três tipos de spa através do banco de dados do SpaServer: t002 (ST5 ou ST231), t021 (ST30, ST33 ou ST55) e t318 (ST30), todos albergando SCCmec IV. Estes resultados sugerem uma possível presença de dois clones epidêmicos circulando nestes pacientes: USA800/Pediátrico (ST5, SCCmec IV) e Oceania Southwest Pacific Clone - OSPC (ST30, SCCmec IV). As amostras tipificadas apresentaram sequências repetitivas longas, a maioria com mais de oito repetições na região X do gene spa. Não houve resistência à vancomicina, sendo a CIM de 1 µg/mL (69/80, 86%) a mais prevalente. Concluímos uma homogeneidade de distribuição de tipos de spa por paciente, demonstrando uma possível capacidade de persistência destas linhagens, o que pode contribuir para a cronicidade da colonização/infecção. O entendimento da distribuição das cepas de MRSA em pacientes com FC é importante na orientação de estratégias para o controle da disseminação.
The prevalence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolated from respiratory tract secretions in Cystic Fibrosis (CF) patients has risen dramatically over the past decade. Persistent MRSA infection in these patients has been associated with more rapid decline in lung function, increased hospitalization and mortality. Molecular typing studies of MRSA chronically colonizing/infecting CF patients is still scarce. The aim of this study was to perform molecular typing in MRSA isolates from 12 pediatric patients with CF chronically colonized/infected. From the results of the previous study of our group (antimicrobial resistance profile, SCCmec types, presence/absence of lukS/F genes and PFGE pulses), 80 isolates were selected for the current study. The sequencing of the X region of the protein A gene (spa) was used for molecular typing of the 80 MRSA isolates selected. Vancomycin minimum inhibitory concentration (MIC) were determined by broth microdilution in all selected isolates. The highest rates of resistance were observed to erythromycin (62/80, 77.5%), ciprofloxacin (41/80, 51.25%) and clindamycin (27/80, 33.75%); none of the isolates were resistant to linezolid. Three SCCmec types were detected: II (14/80, 17.5%), III (7/80, 8.75%) and IV (59/80, 73.75%). Only 8.75% (7/80) of the isolates were PVL positive (all SCCmec IV). Thirty-eight PFGE pulsotypes were identified in the 80 MRSA isolates, showing high genetic diversity. The most common spa types were t002 (52.5%), t539 (15%) and t779 (8.8%). We identified a new type of spa (t18066) in three isolates. Characteristically, the spa t002 was the most distributed, detected in 10 of the 12 patients. Multidrug-resistant were observed for all typed isolates as t539, t779 and t8784. Only three spa types were mapped on the ST (Sequence Type) types using SpaServer database: t002 (ST5 or ST231), t021 (ST30, ST33 or ST55) and t318 (ST30), all were positive for SCCmec IV. These results suggest a possible presence of two epidemic clones circulating in these patients: USA800/Pediatric (ST5, SCCmec IV) and Oceania Southwest Pacific Clone - OSPC (ST30, SCCmec IV). The typed isolates showed long repetitive sequences, most with more than eight repeats in the X region of the spa gene. All of the samples were susceptible to vancomycin, and the MIC for 86% of the isolates was of 1 μg/mL. We conclude that a homogeneity of spa types was observed in the isolates per patient, demonstrating a possible persistence capacity of these lineages, which contributes to the chronicity of the colonization/infection. The study of the distribution of MRSA strains in CF patients is important for implement the strategies for dissemination control.
