Caracterização fenotípica e molecular de Pseudomonas aeruginosa resistentes a carbapenêmicos isoladas de secreções respiratórias de pacientes com fibrose cística
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A Pseudomonas aeruginosa é um microrganismo ubíquo, mas de extrema importância como patógeno oportunista, especialmente por apresentar fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos, gerando dificuldades na sua erradicação. Quando presente em infecções respiratórias nos pacientes com fibrose cística (FC), está associado a altas taxas de morbidade e mortalidade. É notável a sua tendência aumentada a um padrão de multidrogarresistencia (MDR). Outro ponto relevante é o desenvolvimento de resistência a classes de drogas utilizadas para o tratamento de infecções causadas por esse microrganismo, a exemplo dos carbapenêmicos. Este estudo teve como objetivo investigar, através de métodos fenotípicos e moleculares, a evolução temporal da resistência aos carbapenêmicos e a ocorrência de amostras MDR, em pacientes com FC, com infecção pulmonar crônica, acompanhados em dois centros de referência, na cidade do Rio de Janeiro. As amostras de P. aeruginosa foram obtidas a partir de três tipos de espécimes clínicos respiratórios, a saber: escarro, swab de orofaringe e secreção traqueal. As 179 amostras analisadas foram selecionadas por seus resultados no teste de disco-difusão em ágar (TDD), por se apresentarem, nos anos de 2012 e 2013, como não sensíveis ao imipenem, meropenem e/ou doripenem. Fez-se, então, uma busca dos resultados das culturas do ano de 2010 até 2014, para um análise evolutiva dos padrões de resistência. Determinou-se a concentração inibitória mínima (CIM) para 79 amostras não sensíveis a esses carbapenêmicos. Os testes fenotípicos como o método de inibição das carbapenemases, teste de Hodge clássico e modificado, foram aplicados para a detecção da produção de carbapenemases. A reação em cadeia da polimerase foi utilizada como teste molecular, para a detecção dos genes blaIMP, blaVIM, blaKPC, blaSPM e blaNDM, que codificam as enzimas com atividade de carbapenemase mais comumente encontradas em nosso país. O escarro foi o espécime clinico mais coletado, representando 86% do total. De acordo com os dados do TDD, destacamos a presença de 67 perfis de não sensibilidade, sendo o perfil GEN-AMI-TOB o mais frequente entre os pacientes adultos e o IMP, nos pediátricos. O percentual geral de amostras MDR foi de 51,9%, e a maior parte dessas amostras foi oriunda de pacientes adultos. Para determinar a CIM, selecionaram-se 79 amostras, que apresentaram resistência a pelo menos um dos carbapenêmicos testados. O maior percentual de resistência foi observado na CIM para o imipenem, com índice de 40,7%, e a maioria das amostras com esse padrão era de pacientes pediátricos. A pesquisa dos genes para as carbapenemases IMP, VIM, KPC, SPM e NDM não revelou amostras positivas. A vigilância epidemiológica das amostras e seus mecanismos de resistência são cruciais para a terapia, bem como para o sucesso da resposta do paciente ao tratamento.
Pseudomonas aeruginosa is an ubiquitous microorganism, however is important opportunistic pathogen, especially due to their virulence factors and antimicrobial resistance, that could related to your eradication. When this microorganism is present in the respiratory tract, in patients with cystic fibrosis (CF), it is associated with high morbidity and mortality. It is remarkable to an increased tendency multidrug pattern, as well as its strength class development usual drugs used for the treatment of infections caused by this microorganism, such as carbapenems. This study aimed to investigated, using phenotypic and molecular methods, the evolution of resistance to carbapenems and the occurrence of MDR isolates in CF patients with chronic pulmonary infection, assisted in two reference centers in the Rio de Janeiro. The strains of P. aeruginosa were obtained from three respiratory clinical specimens, such as: sputum, oropharyngeal swab and tracheal secretion. The 179 isolates analyzed were selected for their results in the disk diffusion test (DDT) from the years 2012 and 2013, as not susceptible to imipenem, meropenem and / or doripenem. We analyzed the culture results from the years 2010 until 2014, for an evolutionary study of resistance patterns. Minimum inhibitory concentration was performed for 79 isolates that were not susceptible to carbapenems by disk diffusion. Phenotypics testing of the method of inhibition of carbapenemases (MIC), classic Hodge test and modified were applied to detect the presence of carbapenemases. The polymerase chain reaction to detection of genes blaIMP, blaVIM, blaKPC, blaSPM and blaNDM encoding enzymes with carbapenemase activity most commonly found in our country was performed. Sputum was the clinical specimen most frequently collected, representing 86% of the total. According to the DDT, we highlighted the presence of 67 non susceptible profiles, the profile most frequent among adults was GEN-AMI-TOB and profile IMP was for the pediatric patients. 51.9 % was classified as MDR and the majority of these isolates were obtained from adult patients. To determine the CIM, we selected 79 samples, which showed resistance to at least one carbapenems. The highest percentage of resistance was observed in MIC for imipenem 40.7 %, and most of the samples to this standard were obtained in pediatric patients. PCR for genes for carbapenemases IMP, VIM, KPC, SPM and NDM revealed no positive samples. Epidemiological studies of samples and their mechanisms of resistance are crucial for therapy as well as for the success of the patient's response to treatment.
