Breast cancer is the most frequent cancer among women and about 5-10% of breast cancer cases are associated with family history or hereditary predisposition. About 25% of breast cancer cases are due to alterations on the high risk genes, BRCA1, BRCA2 and TP53. The protein p53 play important roles in the development of breast cancer and, when mutat ed, can increase susceptibility of this disease, mainly at early ages. The purpose of this study was to identify germline mutations in BRCA1, BRCA2 and TP53 genes in high risk families. We have analyzed 25 families attending the High Risk ambulatory of the Fernandes Figueira Institute, located in Rio de Janeiro. After extraction of genomic DNA, we performed the sequencing of the genes mentioned above, according to the family's previous classification. Only 1 clinically significant mutation was detected in 1 family. The p.R337H is an important mutation on TP53, located on exon 10 and detected among Brazilian families with risk of developing cancer. About the study performed with the lymphoblastoid cells, it was observed that after gamma irradiation none of the cells presented significantly different behavior on viability nor on frequency of micronucleus and apoptosis. Thus, in conclusion, except for the p.R337H mutation in TP53 detected in one family (MFS34), it was not possible to detect a shared germline mutation responsible for the families heredity, making important to investigate other genes, besides those analyzed in this study. Besides that, the results seen with the lymphoblastoid cells suggests that the mutant p53 do not influence the viability and the formation of micronucleus after gamma irradiation, though more experiments must be done to confirm these results.
O câncer da mama é a neoplasia mais frequente entre as mulheres e cerca de 5 a 10% dos casos são hereditários ou familiares. Acredita-se que parte (25%) das agregações familiares de câncer da mama é causada por alterações em genes considerados de alto risco para essa doença, como o BRCA1, o BRCA2 e o TP53. A p53 é um fator de transcrição considerado como um regulador importante envolvido no controle de inúmeras vias celulares ativadas por estresse genotóxico. Mutações germinativas em seu gene (TP53) predispõem ao desenvolvimento precoce de vários tumores, sendo o câncer da mama o mais frequente. O presente trabalho teve como objetivo a pesquisa de mutações germinativas nos genes BRCA1, BRCA2 e TP53 a partir do DNA genômico de mulheres de alto risco para o câncer da mama e também a análise funcional da p53 mutante, através do desenvolvimento de linhagens linfoblastóides (LFBs) originadas de indivíduos portadores de mutação. Foi realizada a análise de 25 famílias do ambulatório de Alto Risco do Instituto Fernandes Figueira, Rio de Janeiro. Após a extração do DNA genômico do sangue periférico, foi realizado o sequenciamento direto dos éxons dos genes acima citados, de acordo com a classificação da família. Somente 1 mutação clinicamente importante foi detectada em 1 família. A mutação p.R337H está localizada no éxon 10 do TP53 e já foi identificada em famílias brasileiras com risco de desenvolver câncer. Resultados preliminares com as linhagens linfoblastóides (2 selvagens para p53, LY04 e LY05, e 1 mutada para p53, LFM1.1) indicam que, após irradiação com raios gama, não ocorreram alterações significativas em nenhum dos 3 parâmetros analisados (viabilidade celular, quantificação de micronúcleos e de células apoptóticas). Então, de acordo com os resultados, somente uma mutação clinicamente importante foi detectada, a p.R337H, em uma das famílias analisadas (MFS34) e não foi possível identificar um fator hereditário comum a todas as famílias e responsável pela agregação de casos de câncer de mama, tornando necessária a análise do status mutacional de outros genes. Quanto as linhagens linfoblastóides, não foi possível observar diferenças significativas em relação ao papel do background genético ou do efeito das baixas doses, sendo necessários mais experimentos para confirmar esse comportamento.
