As doenças inflamatórias constituem um grupo heterogêneo e complexo de doenças que são causa importante de morbidade e mortalidade no mundo. Este fato instiga cada vez mais a busca por alternativas terapêuticas eficazes e seguras. As estatinas são compostos bioativos que inibem a 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A redutase (HMG-CoA redutase), enzima responsável por regular a velocidade da síntese de colesterol. Deste modo, age reduzindo os níveis de colesterol tecidual e por isso, são fármacos utilizados em pacientes com hipercolesterolemia. Entretanto, ao inibirem a HMG-CoA redutase, essas moléculas acabam reduzindo a síntese de vários isoprenoides por interromper a via do mevalonato/ácido mevalônico e, portanto, geram alguns dos efeitos pleiotrópicos. Os derivados da atorvastatina testados (PCSR09.001, PCSR08.002, PALP 002/13 F e PALP 005/13 JBC) foram desenvolvidos como antiparasitários. Porém, devido a presença de porções com conhecida ação anti-inflamatória em sua estrutura química, foram utilizados com o objetivo de se investigar sua atividade anti-inflamatória e toxicidade. Para tal, foram realizados testes in vitro a fim de verificar a viabilidade celular (ensaio de viabilidade celular com WST-1); a proliferação e a ativação de macrófagos da linhagem RAW 264.7 (ensaio modificado com WST-1), a análise de citocinas e de marcadores de superfície celular envolvidos na inflamação, bem como a migração, a morte, e o ciclo celular. De acordo com os resultados observados neste estudo, os derivados PCSR09.001 e PALP 002/13 F não apresentaram citotoxicidade (p<0,05) para os macrófagos RAW 264.7, enquanto PCSR08.002 apresentou efeitos citotóxicos para células apenas na maior concentração testada e PALP 005/13 JBC foi citotóxico nas concentrações de 10, 100 e 1000 μM. Considerando o Índice de Estimulação no ensaio modificado com WST-1 - na concentração em que a maioria dos derivados não apresentaram toxicidade (100 μM) - PCSR08.002 e PCSR09.001 foram os mais eficazes, seguidos por PALP 002/13 (p<0,05). A dosagem de citocinas e a expressão dos marcadores de superfície, sugeriram que a molécula PCSR08.002 seja a que melhor modula a inflamação. Os dados obtidos através da citometria de fluxo e do ensaio de migração celular, mostraram que os derivados PCSR08.002 e PCSR09.001, nas concentrações de 100 μM e 10 μM, respectivamente, apontam os menores níveis de apoptose e a maior inibição da migração dos macrófagos.
Inflammatory diseases constitute a heterogeneous and complex group of diseases that are an important cause of morbidity and mortality in the world. This fact increasingly instigates the reasearch for effective and safe therapeutic alternatives. Statins are bioactive compounds that inhibit 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) reductase, the enzyme responsible for cholesterol synthesis regulation. By this mean, acts to reduce the levels of tecidual cholesterol and are used as drugs in patients with hypercholesterolemia. However, HMG-CoA reductase inhibiting, these molecules reduce the synthesis of various isoprenoids because it also interrupts the mevalonate/mevalonic acid, generating some of the pleiotropic effects of these molecules. The atorvastatin derivatives tested (PCSR09.001, PCSR08.002, PALP 002/13 F and PALP 005/13 JBC) were developed as antiparasitics. Due to the presence of portions with known anti-inflammatory action in their chemical structure, it was used in order to investigate anti-inflammatory activity and toxicity. To do so, in vitro tests were performed to analise cell viability (cell viability assay with WST-1); proliferation and activation of RAW 264.7 macrophages (WST-1 modified assay), analysis of cytokines and cell surface markers involved in inflammation, as well as migration, death, and cell cycle. According to the results, PCSR09.001 and PALP 002/13 F did not present cytotoxicity (p <0.05) for RAW 264.7 macrophages, whereas PCSR08.002 presented cytotoxic effects to cells only in the largest concentration tested and PALP 005/13 JBC was cytotoxic at concentrations of 10, 100 and 1000 μM. Considering the Stimulation Index in the modified WST-1 assay - at the concentration where most of the derivatives showed no citotoxicity (100 μM) - PCSR08.002 and PCSR09.001 were the most effective, followed by PALP 002/13 (p < 0.05). Cytokine amount and expression of surface markers have suggested that PCSR08.002 molecule is the one that best modulates inflammation. Data obtained through flow cytometry and cell migration assay have shown that PCSR08.002 and PCSR09.001 derivatives, at concentrations of 100 μM and 10 μM, respectively, indicate the lower levels of apoptosis and the greater inhibition of macrophage migration.
