O objetivo do presente trabalho foi fazer um estudo comparativo das interações dos fármacos haloperidol (HPD), biperideno (BPD) e clonazepam (CNZ) com as albuminas humana e bovina, utilizando a técnica de supressão da fluorescência. Esta técnica se utiliza da emissão natural de fluorescência dos aminoácidos triptofanos presentes nas cadeias das proteínas, quando excitados por luz de comprimentos de onda entre 290 e 295 nm. A dificuldade em se prever os efeitos clínicos dos níveis plasmáticos de drogas transportadas pelo sangue, faz com que a sua ligação às proteínas seja um parâmetro de grande importância farmacológica e toxicológica. Os resultados mostraram os sítios primários para o HPD e CNZ na albumina podem estar localizados no subdomínio IB, enquanto que o BPD se ligaria no subdomínio IIA. Considerando a escala de concentrações testada para cada fármaco, há 2 classes de sítios na HSA para o HPD, e apenas uma classe para o BPD e o CNZ. Dentre eles, o único fármaco que se liga formando complexo com a HSA é o HPD. Em pequenas concentrações, o BPD reduz a fluorescência da HSA por supressão do tipo colisional, mas com aumento da concentração deste fármaco, passa a ocorrer também a supressão estática. No caso do CNZ, a supressão ocorre apenas por colisão, para todas as concetrações testada. Para razão fármaco/HSA de 1/1000, constantes de Stern-Volmer a 37 ºC estimadas para o HPD, BPD e CNZ foram, respectivamente, 2,17(±0,05) × 107 M-1 e 2,01(±0,03) × 108 M-1, 2,10(±0,04) × 107 M-1. O estudo da competição por sítios de ligação na HSA através das titulações do complexo HSA-HPD pelo BPD e CNZ, e da solução HSA contendo CNZ titulada pelo BPD, confirmam que os três fármacos não competem entre eles por sítios de ligação, não afetando portanto, um os níveis plasmáticos do outro. Entretanto, a interação da HSA com um deles (HPD ou CNZ) provoca mudanças conformacionais na estrutura da proteína, resultando em aumento ou diminuição da acessibilidade (ou a internalização) ao Trp, ou sítios de ligação, para o outro fármaco (BPD ou CNZ).
The aim of this study was to make a comparative study of the interactions of drugs haloperidol (HPD), biperiden (BPD) and clonazepam (CNZ) with human and bovine albumin, using the fluorescence suppression technique. This technique uses the natural fluorescence emission of tryptophan present in the amino acid chains of proteins, when excited with light of wavelengths between 290 and 295 nm. The difficulty in predicting the clinical effects of plasma levels of drugs transported by the blood makes the protein binding a parameter of great importance pharmacological and toxicological. The results showed the primary site for HPD and CNZ in albumin may be located in subdomain IB, while the BPD would bind the subdomain IIA. Considering the concentration range for each drug, there are two classes of sites on HSA for HPD and only a class for BPD and CNZ. Among them, only HPD binds forming complex with HSA. In small concentrations, BPD reduces fluorescence of HSA by collisional quenching, but as increased drug concentration also occur static quenching. In the case of CNZ, occurs only collision quenching, for all tested concetrações. For ratio drug/HAS 1/1000, Stern-Volmer constant at 37 ° C for HPD, BPD and CNZ were respectively 2.17 (± 0.05) × 107 M-1 and 2.01 (± 0.03) × 108 M-1, and 2.10 (± 0.04) × 107 M-1. The study of competition for binding sites on HSA by means of titrations of HSA-HPD complex by BPD and CNZ, and the solution HSA content HSA by BPD confirmed that the three drugs do not compete with them for binding sites. However, the interaction of HSA with one (HPD or CNZ) causes conformational changes in the protein structure resulting in increased or decreased accessibility (or internalized) to Trp or binding sites for other drug (BPD or CNZ ).
